薄層層析
thin-layer chromatography;TLC
定義:將固定相與支持物制作成薄板或薄片,流動(dòng)相流經(jīng)該薄層固定相而將樣品分離的層析系統(tǒng)。其特點(diǎn)是樣品用量少,分析快速。按所用固定相材料不同,有吸附、分配、離子交換、凝膠過(guò)濾等薄層層析方法。
學(xué)科:生物化學(xué)與分子生物學(xué)_方法與技術(shù)_分離純化技術(shù)_層析技術(shù)
相關(guān)名詞:固定相 流動(dòng)相 分離技術(shù) 顯色劑
圖片來(lái)源:視覺(jué)中國(guó)
【延伸閱讀】
薄層層析是以涂布于載體上的基質(zhì)為固定相,以液體為流動(dòng)相,對(duì)混合樣品進(jìn)行分離、鑒定和定量的一種層析分離技術(shù),常用于鑒定小分子物質(zhì)和制備少量樣品,如生物堿、氨基酸、單糖及其衍生物等。根據(jù)固定相的種類(lèi)可分為吸附薄層層析、分配薄層層析和離子交換薄層層析等。
薄層層析操作方法一般為:薄板制備、點(diǎn)樣、展層、顯色和結(jié)果分析。薄板制備是將吸附劑和黏合劑按一定比例混合,加入適量水調(diào)勻,用涂布器將勻漿緩慢移過(guò)基底板,放置晾干,烘烤活化后即可使用。市面上有很多制好的薄層板,可直接使用。點(diǎn)樣是用點(diǎn)樣器將樣品點(diǎn)樣于薄層板上,點(diǎn)樣點(diǎn)須保持在一條與底邊平行的直線上,距底邊≥1.5厘米。點(diǎn)樣原點(diǎn)小而圓,直徑≤2毫米,兩點(diǎn)間隔≥1.5厘米。點(diǎn)樣時(shí)務(wù)必注意不要損傷薄層表面。點(diǎn)樣結(jié)束后,用電吹風(fēng)吹干薄板。展層是將點(diǎn)好樣的薄層板放入預(yù)先飽和的展層裝置內(nèi),讓點(diǎn)樣一端進(jìn)入展層劑中,其深度約0.5厘米。當(dāng)展層劑上升至離薄層板另一端0.5至1厘米時(shí)停止展層,去除薄層板,用電吹風(fēng)迅速吹干。顯色和結(jié)果分析是將薄層板浸泡于顯色劑中,有些薄層可采用噴霧法或紫外燈/熒光燈照射法顯色,根據(jù)顯色劑顯出的斑點(diǎn)進(jìn)行結(jié)果分析。
薄層層析具有以下優(yōu)點(diǎn):
1.展層時(shí)間短,分離混合物一般僅需15至60分鐘;
2.設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便;
3.靈敏度高;
4.溫度變化和溶劑飽和度對(duì)Rf值影響較小;
5.可使用腐蝕性顯色劑。
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